大田軟海綿酸抗原

 腹瀉性貝類毒素抗原，通過化學偶聯(lián)將軟海綿酸毒素分子偶聯(lián)到載體蛋白BSA上，產(chǎn)品可用于ELISA，免疫層析等檢測產(chǎn)品的研制，用于腹瀉性貝類毒素毒素檢測，靈敏度高，效價高。

免疫分析法是基于抗體與抗原或半抗原之間的高選擇性反應而建立起來的一種生物化學分析法，即根據(jù)抗原-抗體反應，采用特異性抗體來檢測藥物、激素、蛋白質(zhì)、微生物等物質(zhì)的定量分析方法。免疫分析法主要包括酶聯(lián)免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、放射性免疫法、熒光免疫法等，具有方便、快速的特點，但也存在一定的缺點，如費用較高、毒素之間的交叉反應難避免、實驗結(jié)果重現(xiàn)性較差等。

ELISA是檢測海洋生物毒素所采用的主要免疫方法。該技術可用目測，也可用酶標儀測定光密度值，具有易定性定量的優(yōu)點^[6]。Tsao等^[7]采用單克隆抗體ELISA檢測法檢測ASP中的軟骨藻酸(domoic acid, DA)，并建立了基于單克隆抗體的膠體金免疫條檢測法；該方法的檢測限為5 ng/mL，在10 min內(nèi)就可完成測定，提示免疫條檢測可用來快速檢測貝類樣品中的DA。也有研究者建立了基于基因工程單鏈抗體競爭ELISA檢測方法，該方法最大的優(yōu)勢是毒素可在大腸桿菌中快速、大量得到表達，且容易和其他小分子融合，形成融合蛋白以用于檢測或其他用途；對該方法進行驗證發(fā)現(xiàn)，其與標準高效液相色譜法(high-performance liquid chromatography, HPLC)檢測結(jié)果有較好的相關性^[8]。李軍濤等^[9]建立DSP免疫熒光層析試紙條檢測方法，靈敏度可達0.125 μg/mL，達到我國貝類產(chǎn)品中DSP所允許的*。Dubois等^[10]建立了間接競爭ELISA方法檢測STX，該方法用毒素的偶聯(lián)物免疫產(chǎn)生的抗體來檢測貽貝、牡蠣和扇貝中的STX類毒素；在檢測之前，用90%的乙醇溶液將STX類毒素從貝類組織里快速提取出來，該方法的*檢測限為5 μg/kg。Garthwaite等^[11]也建立了4類貝毒的ELISA方法，均可滿足貝類提取物中樣品的鑒定，且樣品回收率較高。TTX為氨基全氫喹唑啉型化合物，是自然界中所發(fā)現(xiàn)的毒性最大的神經(jīng)毒素之一^[12]。Thattiyaphong等^[13]建立了一種側(cè)流免疫層析技術來實現(xiàn)TTX的快速檢測，并運用該方法檢測了河鲀及食用魚中TTX的含量；與液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS)相比，該方法的靈敏度為94.0%，特異性為92.4%。總的來說，側(cè)流免疫層析技術可用于大批量樣本的篩選，陽性結(jié)果的樣本再使用LC-MS/MS進行確認，減少了LC-MS/MS的測試量，降低了檢測成本。Reverte等^[14]開發(fā)了一種基于雙硫醇自組裝單分子膜的新ELISA方法，該方法可用于檢測河鲀中TTX的含量，檢測限為0.23 mg/kg，其與LC-MS/MS法的相關性為0.991。

大田軟海綿酸(okadaic acid, OA)是DSP中的主要成分，屬于聚醚類海洋生物毒素，尚無致死病例，但長期攝入可以致畸及致癌^[15]。劉仁沿等^[16]通過細胞融合，制備抗OA單克隆抗體和膠體金標記抗體，建立快速檢測OA的免疫層析試紙條分析方法，該方法檢出限為500 ng/mL。該研究組在此基礎上進行改進，使用卵清蛋白合成高耦聯(lián)比的包被抗原，以硝酸纖維素膜為載體，改進后方法檢測限達12 ng/mL^[17]。張洋等^[18]采用自行研發(fā)的免疫膠體金試紙條對雙貝殼類DSP的主要成分OA的污染情況進行調(diào)查，通過與ELISA檢測法的結(jié)果進行比較，發(fā)現(xiàn)該方法檢測結(jié)果準確可靠，未出現(xiàn)假陽性結(jié)果。Johnson等^[19]對4種已經(jīng)商業(yè)化的快速檢測試劑盒是否可檢測英國雙殼貝類中的DSP進行驗證。這4種試劑盒包括1種ELISA試劑盒、1種蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A，PP2A)試劑盒以及2種側(cè)流免疫測定(lateral flow immunoassay, LFI)試劑盒。實驗結(jié)果表明，ELISA與LC-MS/MS具有較好的相關性，且不存在結(jié)果偏大的情況，但是存在假陰性結(jié)果；2種LFI試劑盒與LC-MS/MS檢測結(jié)果大部分具有一致性，但存在假陰性結(jié)果。總的來說，選擇何種方法去檢測DSP主要取決于檢測要求、實驗室的條件、實驗人員是否經(jīng)過訓練以及對結(jié)果的要求是半定量的還是定性的。